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木瓜蛋白酶过氧化物模拟酶性质及其分析应用(下)

发布时间:2020-07-18 07-07-23浏览次数:182

过氧化物制造商发现,木瓜蛋白酶具有过氧化物酶模拟物的催化活性,并且可以在H2O2存在下催化底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB),邻苯二胺(OPD)的氧化。),2,2'-重氮双(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS),其催化活性与pH值,温度,过氧化氢浓度和孵育时间有关,条件为pH  5.5、35℃,1 mM和2 h。 稳态动力学结果表明,其催化行为符合典型的Michaelis-Menten动力学模型,其催化机理遵循乒乓机理。 同时,我们分析了未知的成分。电感耦合等离子体质谱法的结果表明,过氧化物酶模拟酶的催化活性并非源自其中所含的金属杂质。 与HRP孵育不同时间后,过氧化物酶模拟酶活性的测量结果表明,过氧化物酶活性可能来自未知杂质。 木瓜蛋白酶不仅具有蛋白酶的功能,而且具有与过氧化物酶相似的功能。 这为进一步了解酶的功能提供了新的依据。生物医学中过氧化氢(H2O2)的检测在环境保护和食品工业等许多领域具有重要意义。 

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作为过氧化物酶的模拟酶,木瓜蛋白酶可以催化TMB和H2O2的显色反应,随后产物的颜色处于较高的吸收波长(652 nm)。 吸光度与H2O2的浓度相关,因此可以直接检测过氧化氢的浓度。 葡萄糖可以在葡萄糖氧化酶(GOx)的催化下定量产生过氧化氢和葡萄糖酸,结合TMB-H2O2的显色反应,我们还提供了一种简单,方便,灵敏且高选择性的比色法来检测葡萄糖成立。 谷胱甘肽(GSH)在自然界中广泛存在,其巯基对于维持细胞中的还原环境具有重要作用。 作为过氧化物酶模拟酶,木瓜蛋白酶可以催化H2O2氧化TMB,所得蓝色物质在652 nm处具有吸收峰。 该显色反应需要阳离子自由基的参与,并且还原GSH可以与阳离子自由基反应以再生TMB,从而导致TMB氧化产物减少,蓝色褪色以及652 nm处的吸光度降低。 在此基础上,我们设计了一种新型谷胱甘肽比色传感器,线性范围为0.1-10μM,检出限为0.03μM。 如果本文中有任何侵权,请联系过氧化物厂家进行删除,谢谢!